多种遗传学检测技术在脐血穿刺中的临床应用研究
袁慧珍,刘艳秋,周萍,王欣荣,黄淑晖
(江西省妇幼保健院医学遗传中心 江西省出生缺陷防控重点实验室 江西省医学领先学科建设计划项目,南昌 330006)
据统计全世界每年有500多万出生缺陷,我国每年出生缺陷儿100多万,占出生人口的5%。其中遗传因素占25%,环境因素约占10%;
遗传和环境综合或病因未知占65%[1]。如果染色体发生数目或结构的异常,将会引起许多基因的缺失或重复,因而染色体病常表现为多种异常或畸形的综合征[2]。近年随着产前分子诊断遗传学技术的发展,荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)技术、荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Fluorescent Polymerase Chain Reaction,QFPCR)技术、染色体微阵列技术(Chromosomal Microarray Analysis,CMA)、低深度全基因组拷贝数变 异测序 (Copy Number Variation Sequencing,CNV-seq)等已逐渐成熟及广泛应用于临床,其中QF-PCR可以根据短串联重复序列(Short Trandem repeat,STR)等位基因的个性化信息判别多余染色体的来源,鉴别母体细胞污染(Maternal Cell Contamination,MCC),也可快速诊断出目标染色体的非整倍体数目异常[3];
CMA缓解了传统核型分析的压力,同时在深度上更详细地对染色体数目和结构进行分析,并能综合染色体微缺失微重复的片段位置、大小、来源及数据库和相关文献对其致病性进行评估[4]。妊娠中晚期抽取脐血进行染色体分析是产前诊断的主要方法之一,本文对576例胎儿脐血染色体检查的结果进行了回顾性分析,现报告如下。
1.1 一般资料 2019年1月至2021年4月在江西省妇幼保健院产前诊断中心行脐血穿刺的孕妇576例,均进行染色体核型分析、QF-PCR及CMA检测,孕周≥24周,年龄18~39岁;
若无创DNA提示胎儿性染色体异常,同时进行FISH检测。脐血穿刺指征:超声提示胎儿发育异常、夫妇之一为染色体异常携带者、母血中胎儿游离DNA检测(non-invasive prenatal test,NIPT)阳性、不良生育史等。所有孕妇均签署知情同意书。
1.2 方法 在超声引导下抽取2~4 mL脐血标本进行染色体核型分析、QF-PCR及CMA检测;
若无创DNA检测结果提示性染色体异常,同时进行FISH检测。查询国际数据库包括DECIPHER、Database of Genomic Variants (DGV)、Online Mendelian Inherit-ance in Man(OMIM)、UCSC Genome Browser、ENS EMBL等进行致病性分析,依据ACMG(American College of Medical Genetics and Genomics)判读指南进行CNVs致病性的判读。
2.1 染色体核型与FISH结果 在576例脐血穿刺中,经染色体核型分析共发现染色体核型异常78例和染色体多态性变异42例,胎儿染色体核型异常检出率13.54%(78/576),其中染色体数目异常占78.20%(61/78),染色体结构异常占21.80%(17/78);
常染色体异常占66.67%(52/78),三体综合征占65.38%(51/78),其中最多的是21-三体综合征,占51.28%(40/78);
性染色体异常占20.51%(16/78)。FISH结果与染色体核型结果一致。见表1。
2.2 染色体微阵列分析结果 与核型分析结果不一致且具有临床意义的拷贝数变异21例,额外增加了3.65%(21/576)的异常检出率。见表2。
表1 染色体异常核型及多态性变异核型
1例脐带血存在一定比例的母源污染,通知孕妇重新取样检测,重新取样后的检测结果与染色体核型结果一致;
其他均无母体细胞污染。无法判断是否存在18号染色体数目异常2例,其余与染色体核型结果一致。
染色体是遗传物质的载体,由DNA和蛋白质等构成,具有储存和传递遗传信息的作用。如果染色体发生数目或结构的异常,将会引起许多基因的缺失或重复,因而染色体病常表现为多种异常或畸形的综合征,又称为染色体综合征[2]。
本研究中,在576例脐血穿刺中,检出染色体核型异常78例和染色体微缺失微重复综合征21例,胎儿染色体异常的检出率为17.19%(99/576),其中胎儿染色体核型异常检出率13.54%(78/576),染色体微阵列分析提高了3.65%(21/576)的异常检出率。胎儿染色体异常的检出率略高于周俊[5]等的研究结果。本文研究对象主要为超声提示胎儿结构异常和NIPT阳性的孕妇,有研究表明:超声结构异常的染色体异常检出率高于超声非结构异常的检出率;
当超声结构异常出现两项及以上时,染色体异常发生率会明显增高[6]。NIPT用于检测胎儿常见的非整倍体及部分性染色体异常,敏感度:21-三体为0.994(0.983-0.998),18-三体为0.977(0.952-0.989),13-三体为0.906(0.823-0.958);
特异性均达到0.999以上[7]。本研究中染色体微阵列分析提高了3.65%(21/576)的阳性检出率。与相关研究结果相符,CMA的阳性检出率仍然较低(并非所有病例都能发现具有临床意义的CNV),对于超声检查发现结构异常但胎儿染色体核型正常的病例,目前CMA增加检出致病性CNV的比例<10%[8]。
小额外标记染色体 (Small Supernumerary Markerchromosome,sSMC)是指在染色体核型分析中,除正常染色体外,出现的不明结构、无法辨别其来源和特征的染色体,导致染色体数量和基因拷贝数发生变化,其可来源于任何一条染色体,携带者临床症状从无到严重畸形[9]。本研究中,1例核型为47,XN,+mar[18]/46,XN[32]的新发标记染色体,CMA结果显示arr[GRCh37]1p21.1q23.1(105438124_157720286)×3,为致病性变异。孕妇及家属知情后选择终止妊娠。
QF-PCR技术是一种利用荧光引物对染色体上特异的短串联重复序列(Shrot Tandem Repeat,STR)位点进行扩增,通过荧光检测对染色体数目异常做出快速产前诊断的方法[10]。同时可以排除胎儿产前诊断样本中的母体细胞污染。本研究中有1例脐带血存在一定比例的母源污染,通知孕妇重新取样检测,重新取样后的检测结果与染色体核型结果一致;
其他均无母体细胞污染。无法判断是否存在18号染色体数目异常2例,其余与染色体核型结果一致。
对于怀疑嵌合的患者,取羊水或脐血等直接进行FISH检测,不受细胞培养过程中选择性生长的影响,可以更真实地反映胎儿体内的细胞嵌合状况,对于判断胎儿预后会有更多帮助[11]。目前英国临床细胞遗传协会已把采用间期细胞的FISH技术作为产前嵌合体检查的筛查方法[12]。本研究中对无创DNA提示胎儿性染色体异常时,进行FISH检测,以提高性染色体嵌合体的检出率。
综上所述,脐血穿刺作为孕中晚期产前诊断的主要手段,必须选择细胞生物学或者分子生物学分析方法,明确产前诊断标本的来源,以免发生母体细胞污染。染色体核型分析与CMA相结合可以提高胎儿异常的检出率,必要时应用FISH进行综合分析,从而更加准确地确定染色体异常类型以及异常核型的嵌合比例,为孕妇及其家属提供精准的遗传学咨询及建议,有效防止缺陷患儿的出生。
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区长,各位领导,同志们:汛期已经来临,我区城区防涝工作面临强大考验,形势不容乐观。年初,区城区防涝排渍指挥部已经召开专题调度会,修订完善应急预案,建立网格化管理机...
【马克思主义】 日期:2024-03-18
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2024年镇作风整治工作实施方案(完整文档)
XX镇作风整治工作实施方案为深入贯彻落实党的二十大精神及省市区委深化作风建设的最新要求,突出重点推进干部效能提升,坚持不懈推动作风整治工作纵深发展,根据《关于印发《2...
【毛泽东思想】 日期:2024-03-18
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2024市优化法治化营商环境规范涉企行政执法实施方案【优秀范文】
xx市优化法治化营商环境规范涉企行政执法实施方案为持续优化法治化营商环境,激发市场主体活力和社会创造力,规范行政执法行为,创新行政执法方式,提升行政执法质效,着力解...
【毛泽东思想】 日期:2024-03-18
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2024年度关于开展新一轮思想状况摸底排查工作通知(完整)
关于开展新一轮思想状况摸底排查工作的通知为深入贯彻落实关于各地开展干部职工思想状况大摸底大排查情况上的批示要求和改革教育第二次调度会议精神,有针对性做好队伍教育管...
【三个代表】 日期:2024-03-18
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2024年公路养护中心主任典型事迹材料(完整文档)
“中心的工作就是心中的事业”——公路养护中心主任典型事迹材料**,男,1976年6月出生,1993年参加工作,2000年4月调入**区交通运输局工作,大学本科学历,中共党员,现任**...
【马克思主义】 日期:2024-03-17