乙肝病毒hbv-dna化验单怎么看【乙肝病毒感染不同阶段HBsAg、HBeAg、HBV-DNA定量检测研究】
外文略词表 外文略语 外文全文 中文释义 HBsAg Hepatitis B surface 乙肝表面抗原 antigen HBeAg Hepatitis B e antigen 乙肝 e 抗原 HBV Hepatitis B virus 乙型肝炎病毒 HCV Hepatitis C Virus 丙型肝炎病毒 HDV Hepatitis D Virus 丁型肝炎病毒 HIV Human Immunodeficiency 人类免疫缺陷病毒 Virus LC Hepatitis Bassociated 乙肝肝硬化 liver cirrhosis HCC Primary hepatic 原发性肝癌 carcinoma EASL European association 欧洲肝脏研究学会 for the study of the liver AASLD American association 美国肝脏病研究协会 for the study of liver diseases CTL Cytotoxic lymphocyte 细胞毒性 T 淋巴细胞 cccDNA Covingently Closed 共价闭合环状 DNA Circular DNA ORF Open Reading frame 开放阅读框架 PCR Polymerase Chain 聚合酶链反应 Reaction CP Core protein promoter 核心蛋白启动子 IT Immune tolerant phase 免疫耐受期 IC Immune clearance phase 免疫清除期期 LR Low level copy phase 非/低水平复制期 ENH HBeAg negative HBeAg 阴性肝炎期 hepatitis IFN Interferon 干扰素 PEG-IFN Pegylated interferon 聚乙二醇化干扰素 ADV Adefovir dipivoxil 阿德福韦酯 LAM Lamivudine 拉米夫定 LDT Telbivudine 替比夫定 ETV Entecavir 恩替卡韦 CHE Cholinesterase 胆碱酯酶 ALB Albumin 白蛋白 AFP Alpha-fetoprotein 甲胎蛋白 ALT Alanine 丙氨酸氨基转移酶 aminotransferase PTA Prothrombin activity 凝血酶原活动度 YMDD Tyrosine - methionine 酪氨酸-蛋氨酸-天门冬 – aspartate – 氨酸 aspartate 天门冬氨酸 GRF Glomendar filtration 肾小球滤过滤 rate 乙肝病毒感染不同阶段HBsAg、 HBeAgHBV-DNA定量检测研究 摘 要 目的:乙肝炎病毒简称乙肝病毒,是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科,完整的乙肝病毒成颗粒状,也会被称为丹娜颗粒(Dane)。中国的乙肝病毒感染率约60%-70%;
乙肝表面抗原携带率约占总人口的7.18%,以此计算,全国约有9300万人携带乙肝病毒,其中慢性乙型肝炎患者约2000万例。因而,探究慢性乙肝不同阶段感染期的乙肝表面抗原定量,乙肝e抗原定量,HBV -DNA定量的相关性及其变化趋势尤为重要。方法:收集天津市第四中心医院体检科慢性乙肝感染患者未治疗血清283例,将其分为四组,分别为慢性乙型病毒性肝炎,代偿期乙肝肝硬化,失代偿期乙肝肝硬化,原发性肝癌阶段四类,分别于基线水平进行HBsAg定量,HBeAg定量以及HBV-DNA定量检测。结果:根据对283例基线水平HBsAg定量,HBeAg定量以及HBV-DNA定量检测结果显示:仅HBeAg(-)慢性乙型肝炎阶段HBsAg与HBV-DNA定量呈正相关,反之HBeAg(+)慢性乙型肝炎,乙肝肝硬化及原发性肝癌阶段HBsAg与HBV-DNA定量两者无关联;
HBeAg(+)慢性乙型肝炎及乙肝肝硬化阶段HBeAg与于HBV-DNA定量呈正相关,反之HBeAg(-)慢性乙型肝炎,原发性肝癌阶段两者无关联;
随着慢性HBV感染由慢性肝炎进入肝硬化,原发性肝癌阶段HBeAg定量、HBV-DNA定量呈现逐渐下降趋势。结论:慢性乙肝BINGDU感染患者在慢性肝炎及肝硬化阶段乙肝e抗原定量与乙型肝炎病毒DNA定量正相关,而随着慢性乙型肝炎患者进入肝硬化和原发性肝癌阶段时,乙肝e抗原定量与乙型肝炎病毒DNA定量逐渐降低。
关键词:慢性乙型肝炎病毒;
乙型肝e抗原;
乙型肝炎病毒表面抗原;
乙型肝炎病毒DNA Quantitative detection of HBsAg, HBeAg and HBV-DNA in different stages of hepatitis B virus infection ABSTRACT 1 前言 目前,HBV感染是一个全球性的问题并且严重威胁到人类的健康[1,2],HBV是引起急性慢性肝炎,肝硬化和原发性肝细胞癌的重要致病因[3],根据2015年世界卫生组织(WHO)发布第一个慢性乙型肝炎防治指南指出,全世界目前约有2.4亿慢性乙肝感染者,每年约有65万人死于慢性乙肝感染[4]。我国HBV的携带者约1.2亿,是乙型肝炎率相对较高的国家之一,现患乙型肝炎患者达3000多万。临床对于乙型肝炎的诊断、抗病毒药物的的应用及观察主要依靠血清学指标及HBV-DNA的检测。血清学检测指标主要有病毒表达产物及其抗原抗体系统,即血清HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和 抗-HBc五项标志物。病毒学检测指标主要有血清HBV-DNA和肝组织中共价闭合环装DNA,即cccDNA等。两对半的检测价值主要可以明确HBV是否感染,HBV-DNA是反映HBV传染性及明确其病毒的复制水平的重要指标,在确定慢性HBV感染自然史、监测抗病毒药物疗效以及评估急慢性乙型肝炎感染的预后等均具有重要意义[5]。血清HBV-DNA的检测方法主要基于分子水平,如实时荧光定量聚合酶链反应法(fluorescence quantitative PCR ,FQ-PCR)等[6]。目前国内外常用的HBV DNA定量检测的商品化试剂灵敏度高、准确性好、方便快速,但实验室要求较为严格,价格相对昂贵,不易普及。HBV cccDNA检测需做肝活检,作为一种有创检查,患者接受度较差,且目前尚无正式批准的商品试剂盒,不宜在临床上开展。此外,由于乙型肝炎病毒血清学标志物组合模式的复杂性和多样性,导致临床上对部分患者的HBV感染复制状况难以判断,甚至漏检其主要原因可能是由于抗原抗体含量低于线性方法的可检出水平,由此可见这些标志物的检测水平直接关系到患者的诊断与观察。
近年来,越来越多研究表明,在慢性乙肝患者抗病毒治疗基线和治疗早期,对血清HBsAg、HBeAg、核心抗体定量检测可以在一定范围上预测患者的远期治疗应答状况。随着检测方法的不断进步与成熟,已经实现了HBsAg和HBeAg的定性检测发展到定量检测,与传统FQ-PCR技术比较,其操作方法简便,耗时较短,成本低廉,易于检测。本研究对慢性HBV感染不同阶段基线水平HBsAg定量、HBeAg定量、与HBV-DNA定量相关性进行分析,从而为慢性乙肝病毒感染者提供更加精确严谨,实用的检测指标。结果显示:HBeAg(-)慢性乙型肝炎中HBsAg定量与HBV-DNA定量存在一定关联,即P<0.05,提示对于HBeAg(-)的慢性乙型肝炎患者可将HBsAg定量检测作为评估临床疗效良好的参照指标;
HBeAg(+)慢性乙型肝炎、失代偿期乙肝肝硬化阶段HBeAg定量与HBV-DNA定量明显相关,即P<0.01,提示出于上述阶段的乙肝病毒感染者HBeAg定量检测更有临床价值。
2资料与方法 2.1 研究对象及分组 收集2015年至2017年天津第四中心医院体检科门诊未进行抗病毒治疗的361例慢性HBV感染者男性272例,女性89例,男女比例3.1:1。根据患者感染HBV后的不同发病阶段分为慢性乙型肝炎152例,其中HBeAg(+)80例,HBeAg(-)72例,代偿期乙肝肝硬化46例,失代偿期乙肝肝硬化组131例,原发性肝癌32例。对其中283例患者进行基线水平HBsAg定量,HBeAg定量以及HBV-DNA定量检测。所有操作严格按照说明书进行。排除甲、丙、丁、戊型肝炎,重叠感染,服用抗病毒药物,人类免疫缺陷病毒等因素干扰。
2.2 仪器与试剂 (1)乙肝表面抗原定量检测 试剂:乙肝表面抗原定量检测试剂盒,应用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)定量检测人血清和血浆中乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 设备名称:全自动免疫分析仪 品牌型号:Architecti2000sr 设备编号:S.928.034-04 产地:美国雅培制药有限公司 (2)乙肝e抗原定量检测 试剂:乙型肝炎病毒e抗原测定试剂盒,应用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA定量检测人血清和血浆中乙型肝炎e抗原(HBeAg) 设备名称:全自动免疫分析仪 品牌型号:Architecti2000sr 编号:S.928.034-04 产地:美国雅培制药有限公司 (3)HBV-DNA定量检测 试剂:中山大学达安基因公司乙肝病毒(HBV)核酸扩增荧光检测试剂盒 设备名称:Roche LightCycler荧光PCR检测仪 2.3 诊断标准 诊断符合2010年中医学会肝病学分会和中华医学会感染病学分会修订的《慢性乙型肝炎防治指南》的诊断标准[7]。原发性肝癌诊断标准参照 1990年全国肿瘤防治办公室和中国抗癌协会合编的《原发性肝癌诊断标准》。对乙肝肝硬化患者肝脏储备功能进行 Child-Pugh 分级,分为 A级、B级和C级。
2.3.1 HBeAg阳性慢性乙型肝炎 血清HBsAg、HBVDNA和HBeAg阳性,抗-HBe阴性,血清ALT持续或反复升高,或肝组织学检查有肝炎病变。
2.3.2 HBeAg阴性慢性乙型肝炎 血清HBsAg、HBV-DNA阳性,HBeAg持续阴性,抗-HBe阳性或阴性,血清ALT持续或反复异常,或肝组织学检查有肝炎病变。
2.3.3代偿期乙肝肝硬化 一般属于Child-Pugh A级。影像学、生物化学或血液学检查有肝细胞合成功能障碍或门静脉高压症(如脾功能亢进及食管胃底静脉曲张)证据,或组织学符合肝硬化诊断,但无食管胃底静脉曲张破裂出血、腹水或肝性脑病等严重并发症。
2.3.4失代偿期乙肝肝硬化 一般属于Child-Pugh B、C级。患者已发生食管胃底静脉曲张破裂出血、肝性脑病、腹水等严重并发症。ALT和AST伴随不同程度的上升,凝血酶原活动度减低。
2.3.5原发性肝癌 1.肝癌血清标记物检测 (1)血清甲胎蛋白(AFP)测定 本法对诊断本病有相对的特异性。放射免疫法测定持续血清AFP≥400μg/L,并能排除妊娠、活动性肝病等,即可考虑肝癌的诊断。临床上约30%的肝癌病人AFP为阴性。如同时检测AFP异质体,可使阳性率明显提高。
(2)血液酶学及其他肿瘤标记物检查 肝癌病人血清中γ-谷氨酰转肽酶及其同功酶、异常凝血酶原、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶同功酶可高于正常。但缺乏特异性。
2.影像学检查 (1)超声检查 可显示肿瘤的大小、形态、所在部位以及肝静脉或门静脉内有无癌栓,其诊断符合率可达90%,是有较好诊断价值的无创性检查方法。
(2)CT检查 CT具有较高的分辨率,对肝癌的诊断符合率可达90%以上,可检出直径1.0cm左右的微小癌灶。
(3)磁共振成像(MRI) 诊断价值与CT相仿,对良、恶性肝内占位病变,特别血管瘤的鉴别优于CT。
(4)选择性腹腔动脉或肝动脉造影检查 对血管丰富的癌肿,其分辨率低限约1cm,对<2.0cm的小肝癌其阳性率可达90%。由于属创伤性检查,必要时才考虑采用。
(5)肝穿刺行针吸细胞学检查 在B型超声导引下行细针穿刺,有助于提高阳性率。适用于经过各种检查仍不能确诊,但又高度怀疑者。
2.3.6 肝硬化患者Child-pugh分级标准如表2-3-6:
表2-3-6肝硬化患者Child-pugh分级标准 临床生化指标 1分 2分 3分 肝性脑病(级) 无 1-2 3-4 腹水 无 轻度 中、重度 总胆红素(umol/L) <34 34-51 >51 白蛋白(g/L) >35 28-35 <28 凝血酶原时间延长(秒) <4 4-6 >6 2.4检测方法 (1)HBsAg定量检测 乙肝表面抗原是乙肝病毒的外壳蛋白,本身不具有传染性,但它的出现常伴随乙肝病毒的存在,所以它是已感染乙肝病毒的标志。它的分子量为2.4×1000000,系由混合的多肽组成,含有脂类、糖类和蛋白质等。HBsAg主要有HBV PreS1、PreS2、S基因转录翻译后而产生的3种糖蛋白,即大、中、小HBsAg[8],也有一部分HBsAg是由整合到人类基因组上的HBV DNA转录翻译而来[9]。慢性乙型肝炎患者血清中存在3种病毒颗粒,分别是大球形颗粒、小球形颗粒和管型颗粒,其中仅大球形颗粒具有病毒核酸和传染性。小球形颗粒和管型颗粒的数量高于大球形颗粒,可刺激机体产生中和性抗体[10]。
CMIA是近几年新开发的一种新的抗原抗体检测技术,采用吖啶酯作为标记发光剂,主要用于测定蛋白质,病毒抗原等大分子物质。采用此方法的试剂具有极高的灵敏度,特异性和稳定性,且放射性极低的优点,能够准确迅速测定HBsAg定量,以美国雅培Architect i2000SR全自动化学发光系统为代表[11]。
(2)HBeAg定量检测 乙型肝炎E抗原,是乙肝病毒核心颗粒中的一种可溶性蛋白质。在一般情况下,HBeAg埋藏于HBcAg内部,当HBcAg裂解时,HBeAg从肝细胞核内溶入血清,它的出现迟于HBsAg,而消失却早于HBsAg,所以是人体感染HBV后跟随HBsAg出现的第2个血清学抗原标志物。HBeAg主要由HBV PreC/C区基因编码的抗原,经高尔基体加工后在肝细胞合成和分泌,在血清中以游离的形式存在,被认为是乙型肝炎患者传染性较强的标志物。HBeAg属于非结构性蛋白,在血清中以可溶性而具体蛋白形式存在,不参与病毒颗粒,可能具有调节宿主免疫功能的作用[12]。此外,根据研究表明,HBeAg的分泌依赖于HBV cccDNA,即HBeAg的分泌水平与细胞核内的HBV cccDNA具有一定的相关性,由此可见,血清HBeAg能够在一定程度上反映出肝细胞HBV cccDNA水平。
目前,HBeAg定量检测没有明确对的商品化检测试剂盒,临床上常用的HBeAg检测方法包括酶联免疫法、电化学发光法、时间分辨荧光免疫法、微粒子化学发光法等。结果样本吸光度(A)值与临界值的比值(S/CO)表示。
2.5观察指标 基线水平测定HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量的部分,计算各感染阶段HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量的均值±标准差(`x±s)。
2.6 分析方法 按HBV感染不同阶段分为慢性乙型肝炎组、代偿期肝硬化组、失代偿期肝硬化组及原发性肝癌组,分别于基线水平分析每组HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量三者之间的相关性;
观察随着慢性乙肝进入肝硬化、原发性肝癌阶段后HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量三者变化趋势。
2.7 统计处理 采用 SPSS 21.0软件进行数据处理,计量资料采用( x ±s)表示,统计结果应用t检验,组间率对比用χ2检验,P<0.05时存在统计学意义,P<0.01统计学意义显著。采用GraphPad Prism 5软件包及Excel进行图片处理。所有检验均为双侧检验,检验水准均为0.01。
3结果 对361例患者其中对283例患者进行基线水平HBsAg定量、HBeAg定量及 HBV-DNA定量检测;
其中基线HBV-DNA水平<5log10IU/mL28例,基线HBV-DNA水平≥5log10IU/mL51例,Chil-Pugh A级20例,Child-Pugh B级25例,Child-PughC级29例。分析慢性HBV感染不同阶段基线水平HBsAg定量、HBeAg定量与HBV-DNA定量相关性分析及三者在慢性HBV感染不同阶段均值变化趋势。
3.1 基线水平 HBsAg 定量、HBeAg 定量与 HBV-DNA 定量水平相关性结果回报 (1)如图3.1.1所示,HBsAg定量与HBV-DNA定量相关性回报:仅于HBeAg(-)慢性乙型肝炎阶段时两者存在相关性,其差异具有统计学意义(P<0.05)。
图 3.1.1 HBeAg(-)慢性乙型肝炎 HBsAg 定量与 HBV-DNA 定量相关性 (2)如图3.1.2、3.1.3所示,HBeAg定量与HBV-DNA定量相关性回报:当慢性HBV感染处于HBeAg(+)慢性乙型肝炎、失代偿期乙肝肝硬化阶段时HBeAg定量与HBV-DNA定量明显相关,HBeAg(+)慢性乙型肝炎阶段两者呈正相关,其统计学意义显著(P<0.01)。
图3.1.2 HBeAg(+)慢性乙型肝炎HBeAg定量与HBV-DNA定量相关性 图3.1.3失代偿期乙肝肝硬化HBeAg定量与HBV-DNA定量相关性 3.2基线水平HBsAg定量、HBeAg定量与HBV-DNA定量在慢性HBV感染不同阶段均值变化趋势结果回报 (1)HBsAg 定量均值水平变化趋势:随着慢性肝炎(CHB)进入乙肝肝硬化(LC)及原发性肝癌(HCC)阶段,HBsAg 定量水平呈逐渐下降趋势,但无统计学意义。
(2)HBeAg 定量均值水平变化趋势:随着慢性肝炎(CHB)进入乙肝肝硬化(LC)及原发性肝癌(HCC)阶段,HBeAg 定量亦呈逐渐下降趋势,即由慢性肝炎进入肝硬化及原发性肝癌时 HBeAg 定量均值逐渐下降并存在统计学意义(P<0.05),其中慢性肝炎阶段中 HBeAg(+)慢乙肝及 HBeAg(-)慢乙肝 HBeAg 定量均值差异亦具有统计学意义(P<0.05)。
(3)HBV-DNA 定量均值水平变化趋势:随着乙肝进展程度加重,HBV-DNA 定量水平呈逐渐下降趋势,即由肝炎进入肝硬化及原发性肝癌时 HBV-DNA 定量均值逐渐下降并具有统计学意义(P<0.05),其中慢性肝炎阶段中 HBeAg(+)慢乙肝及 HBeAg(-)慢乙肝 HBV-DNA 定量均值差异亦具有统计学意义(P<0.05)。(见表 3.2) 表3.1慢性HBV感染的不同阶段基线水平HBsAg定量、HBeAg定量以及 HBV-DNS定量检测结果(`x±s) 分组 慢性乙型病毒型肝炎 结果 代偿期乙肝肝硬化 失代偿期乙肝肝硬化 原发性肝癌 HBeAg(+) HBeAg(-) HBsAg 定量 20176.41± 3844.68± 3031.62±2638.87 3042.79±2753.40 2736.73± (IU/ml) 77410.41 4079.47 2718.58 HBeAg 定量 361.89± 0.41± 129.97±263.07* 106.21±262.45* 45.39± (S/Co) 402.13 0.27* 144.57* HBV-DNA 定量 6.36±1.35 5.21±1.68** 5.62±1.26** 5.48±1.26** 5.35± (log 值) 1.57** *P<0.05,HBeAg(-)慢性乙型肝炎、代偿期肝硬化、失代偿期肝硬化及原发性肝癌阶段 HBeAg 定量值与HBeAg(+)慢性乙型肝炎阶段比较 ** P<0.05,HBeAg(-)慢性乙型肝炎、代偿期肝硬化、失代偿期肝硬化及原发性肝癌阶段 HBV-DNA 定量值与 HBeAg(+)慢性乙型肝炎阶段比较 4讨论 4.1慢性HBV感染不同阶段HBsAg定量、HBeAg定量及HBV-DNA定量相关性及变化趋势分析 本研究探讨慢性 HBV 感染不同阶段 HBsAg 定量、HBeAg 定量及 HBV-DNA 定量相关性,并横向分析 HBsAg、HBeAg 及 HBV-DNA 定量随肝病进展变化趋势,在未行超声、肝纤维化检测、肝穿刺等检查前初步判断肝病进展阶段及发展趋势,评估病情预后。国内外大量研究表明慢性 HBV 感染不同阶段 HBsAg 水平有明显差异,但仅于免疫清除期 HBsAg 定量水平与 HBV-DNA 定量存在相关性[ 13-20]。考虑乙肝病毒基因组功能结构致密,其中前 S-S 基因通过 3 个不同的翻译起始点分别从共同读码框架的 3 个起始密码子开始编码 3 种病毒表面抗原,其中相对分子量 24000 的 S 蛋白数量最多(即 HBsAg),此外乙肝表面抗原(HBsAg)在血清中以球型、管型、Dane 颗粒等三种形式存在,其中球型、管型颗粒因不含有 HBV 遗传物质,而 HBV-DNA 只以 Dane 颗粒形式存在血液中,表面抗原(HBsAg)与 Dane 颗粒这种关系不固定性与量值差异,影响了两者相关性,此外表面抗原定量(HBsAg)是病毒的衣壳蛋白,具有很强的免疫原性,当 HBV-DNA 处于高度复制阶段,其产生的 HBsAg 也多,适应性的产生大量抗-HBs,从而使得 HBsAg 减少, 此外 HBV S 基因变异或低水平感染亦可导致 HBsAg 阴性 HBV 感染[17]。王临旭[14]指出可能与乙肝病毒持续感染的长期积累、变异相关,因此无法从 HBsAg 水平的高低来评判病毒复制的活跃程度。但本研究结果提示在 HBeAg(-)慢性乙型肝炎阶段时 HBsAg 定量与 HBV-DNA 定量存在相关性,说明 HBsAg 定量在一定程度上反映 HBV-DNA 的复制情况,尚有国内外大量研究报道 HBV-DNA 水平和 HBsAg 滴度呈正相关[13,15,19,20]。e 抗原定量(HBeAg)是乙型肝炎病毒核心颗粒中的一种可溶性蛋白质,由前 C 基因编码产生。位于乙肝病毒颗粒核心部分, 存在于完整的 HBV 颗粒中,与 HBV-DNA 呈一对一关系,国内大量学者研究 e 抗原定量(HBeAg)水平降低 HBV-DNA 定量水平随之降低[17,21-24] ,本研究结果显示慢性 HBV 感染处于 HBeAg 阳性慢性乙型病毒性肝炎和失代偿期乙肝肝硬化阶段时,e 抗原定量(HBeAg)与 HBV-DNA 定量相关,进一步证实了 e 抗原定量(HBeAg)与 HBV-DNA 定量间有很好的相关性。传统认为 HBeAg 是复制活跃的标志,HBeAg 阴性或转换成抗-HBe 时, 说明病毒已经被清除或者复制停止,本研究 HBeAg 阴性肝炎组患者 68 例,其中 HBV-DNA 检出者 49 例,HBV-DNA 阳性率 70.59%,考虑 HBV 前 C 区及基本核心启动子(BCP)变异可产生 HBeAg 阴性株,逃避机体免疫反应所致。
Funk ML 认为 HBeAg 阴性慢乙肝 HBV 前 C 区与 C 区基因的突变,致使前 C 区 mRNA 产生减少,阻断了 HBeAg 的形成,导致临床上出现 HBeAg 缺陷的 HBV 血清型,对于 HBeAg 阴性而高病毒载量的 HBV 感染是肝病患者肝炎慢性化、重症化甚至癌变的重要因素。故对于HBV感染者不能仅仅根据血清学指标判断病毒复制情况, HBV 感染者 HBeAg 阴转并不代表乙肝病毒清除,需进一步行病毒定量检测。
表面抗原定量(HBsAg)在慢性 HBV 感染不同阶段, 随着肝病病情的加重呈现逐渐下降趋势,在肝癌阶段表面抗原甚至可能出现阴转[13,15,16,25],裴彦祯等研究显示乙型肝炎进展为肝硬化过程中表面抗原定量(HBsAg)逐渐下降[14];
另有研究表明 CHE 为评价肝脏储备功能良好指标,随肝病进展 CHE 呈逐渐下降趋势,HBsAg 定量亦呈逐渐下降趋势,两者存在显著相关性[26],故随肝病进展表面抗原定量(HBsAg)呈下降趋势,本研究结果与以上研究一致,考虑 HBsAg 不仅能刺激机体产生保护性抗体, 还可以诱导特异性CTL反应的细胞表位, 通过细胞毒性T淋巴细胞清除 HBV,随着免疫清除、肝细胞损伤、修复, 有效即可被病毒感染的肝细胞逐渐减少,故 HBsAg 呈进行性下降趋势[25],但本组研究表面抗原定量(HBsAg)下降趋势无统计学意义,考虑与表面抗原在血清中分泌形式有关。HBeAg 与 HBV-DNA 定量亦呈下降趋势,在统计学意义显著,HBeAg 定量与 HBV-DNA 定量有很好的一致性,可反映体内 HBV 的复制情况,考虑与肝病进展肝细胞大量破坏,纤维组织增生,肝细胞凋亡或耗竭相关。
由此可见,随着肝病进展 HBsAg、HBeAg 及 HBV-DNA 定量呈逐渐下降趋势, HBeAg 定量与 HBV-DNA 定量具有良好相关性,临床上可以根据 HBeAg 定量下降程度初步判断乙肝病毒复制情况。对于处于 HBeAg(-)的慢性肝炎阶段的乙肝患者,可将 HBsAg 定量水平判断治疗效果及临床预后的指标之一。
4.2 HBsAg、HBeAg与HBV-DNA定量检测的意义 乙肝表面抗原(HBsAg)定量检测早在20年前就被提出,乙肝表面抗原(HBsAg)为临床上最常见检出的HBV感染血清学指标之一,近期以血清HBsAg定量作为慢性乙肝抗病毒疗效观察及治疗终点已得到认可,逐渐成为帮助监测感染阶段及治疗应答的有用新指标[15]。乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是机体感染乙型肝炎的标志之一,见于急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化或无症状携带者。国内[14]对于HBV感染自然史中表面抗原水平研究中指出HBsAg滴度在免疫耐受(IT)期最高,非/低水平复制期(LR)期最低,非/低水平复制期(LR)、乙型肝炎e抗原( HBeAg) 阴性肝炎(ENH)以及肝硬化时HBsAg 滴度低于免疫耐受(IT)期、免疫清除(IC)期,其中肝硬化组 HBsAg 滴度明显低于免疫耐受(IT)期、免疫清除(IC)期。与董爱爱[26]、裴彦祯[16]等研究的表面抗原水平(HBsAg)在慢性乙型肝炎进展的不同阶段, 随着病情的加重呈现逐渐下降趋势, 甚至肝癌阶段表面抗原可出现阴转;
杨爱等研究的乙型肝炎病毒携带者状态HBsAg与肝功能水平呈负相关结果一致。
乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性是乙肝病毒复制活跃的标志,当其转变为乙型肝炎e抗体(HBeAb)时,普遍认为病毒已经被清除或者复制停止。达到持久的乙型肝炎e抗原(HBeAg)血清学转换是慢性乙型肝炎抗病毒治疗满意的治疗终点,因而既往的研究更多地关注于HBeAg滴度水平的变化。但部分慢性乙型肝炎患者在HBeAg转阴后血清中仍然可以检测到HBV-DNA,而且还存在些部分HBeAg和HBeAb双阳性的患者[27]。
HBV-DNA水平可直接评估HBV复制水平,近年来HBV-DNA定量检测技术得到了广泛的应用,但是其检测过程存在检测设备复杂、检测环境防污染要求严格,检测价格昂贵、低于检测下限不容易检测出等不利因素,所以不易在基层医院推广。因此,对于一些初诊或大规模的流行病学筛查,乙型肝炎的血清学检测方法仍为首选方法,目前国内外对于乙肝表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)定量与 HBV-DNA定量水平相关性成为研究热潮。表面抗原在血清中以三种形式存在,即球型、管型、Dane 颗粒,而HBV-DNA只以Dane颗粒形式分泌多血液中,其中球型、管型颗粒因不含有HBV遗传物质,表面抗原与Dane颗粒这种量值差异与关系不固定性,影响了表面抗原定量(HBsAg)水平与 HBV-DNA 的相关性,国内大量研究指出[13,15,16]HBsAg定量与HBV-DNA存在正相关性。但谢而付[28]徐敬轩[17]等指出随着HBV-DNA拷贝数的增加,HBsAg量呈下降趋势,考虑可能与HBsAg是病毒的衣壳蛋白,具有很强的免疫原性,当HBV-DNA处于高度复制阶段,其产生的 HBsAg也多,适应性的产生大量抗-HBs,从而使得HBsAg减少,与HBV-DNA呈负相关,和Ozdild [29]等报道相同。而王临旭[14]指出除免疫清除期外,HBV复制与 HBsAg产量之间的关联性相对较弱,无法从HBsAg水平高低来评判病毒复制的活跃程度。长久以来,HBeAg被认为是乙型肝炎患者具有传染性的标志物,通常认为血液中HBeAg阳性,患者体内乙型肝炎病毒处于不停的复制状态,则HBV-DNA 具有高的载荷量[17,28]。但近年研究显示并非如此[13,30,21,31],乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)由前C基因编码产生,为逃避免疫反应,前C区可变异产生HBeAg阴性变异株,导致HBeAg不能表达,但HBV仍处于持续复制状态。有关研究也认为乙肝病毒前C区变异与乙型肝炎慢性化、慢性肝炎活动加剧、爆发性肝炎和肝癌有关,约有30%的慢性乙型肝炎患者HBeAg阳转阴后,HBV仍在复制且病情较重,其中部分可演变为肝硬化和肝癌[32],Pichoud[33]也曾报道过部分慢性乙型肝炎患者经抗病毒治疗后虽然HBeAg转换成抗-HBe,但用定量PCR方法仍可检测到活跃的 HBV复制。因此,抗-HBe阳转也不能一定说明病毒复制的停止或病情的好转。
6结 论 (1)HBeAg(-)慢性乙型肝炎阶段 HBsAg 定量与 HBV-DNA 定量呈正相关(P<0.05)。
(2)HBeAg(+)慢性乙型肝炎、乙肝后肝硬化阶段 HBeAg 定量与 HBV-DNA 定量呈正相关,统计学意义显著(P<0.01)。
(3)HBsAg 定量、HBeAg 定量及 HBV-DNA 定量水平随着慢性肝炎(CHB)进入肝硬化(LC)及原发性肝癌(HCC)阶段均呈下降趋势,其中 HBeAg 定量及 HBV-DNA 定量变化趋势具有统计学意义(P<0.05)。
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