2010-2019,年北京市副溶血性弧菌临床分离株血清型和耐药性分析
曲梅 田祎 黄瑛 刘白薇 张新 吕冰 贾蕾 王全意
副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus, VP)是沿海地区引起食物中毒和夏秋季腹泻的首要病原菌。副溶血弧菌血清型复杂多样。
目前,已知13 个O 抗原和79 个K 抗原[1],有71 种血清型可引起急性胃肠炎。
北京市虽为内陆城市,但近年来,由于饮食习惯和物流的发展,副溶血性血弧菌引起的腹泻也呈上升趋势。
由于抗生素的不规范使用和选择压力,细菌耐药问题也日益严重,许多副溶血性弧菌临床分离菌株出现多重耐药现象[2,3]。
北京市自2010 年以来,在全市二级以上医院肠道门诊开展腹泻病原学监测,为了解北京市副溶血性弧菌血清型变迁和流行特征,现将该市2010-2019 年副溶血性弧菌临床分离株进行血清型和耐药性分析。
1.1 菌株来源 2010 年4 月-2019 年12 月,以北京市16 个辖区为监测点,每区每周采集10 份感染性腹泻病人新鲜粪便样本,全年每区最低监测量330 份,截止到2019 年12 月份,全市共收集46 249 份样本。所有样本进行副溶血性弧菌的分离、培养和鉴定。
1.2 方法
1.2.1 分离培养和生化鉴定: 分离培养参照《感染性腹泻诊断标准》(WS271-2007 )附录B.3 进行。
样本接种于10 mL 含3% NaCl 的碱性胨水中,37 ℃增菌培养6 h。
增菌液划线接种于科玛嘉弧菌显色琼脂平板,置37 ℃培养18 ~24 h。
挑取可疑菌落,采用VITEK2-Compact 全自动微生物鉴定系统(法国梅里埃公司)进行系统生化鉴定。
1.2.2 血清分型: 采用诊断血清(日本生研公司)进行分型。
取一定量细菌于3%NaCl 盐水中,121 ℃,处理30 min,离心10 min(4 000 r/min),弃上清。
取菌体,做O 抗原血清凝集试验。
K 抗原鉴定:直接取浓菌悬液与多价抗K 血清按适当比例混合,出现凝集反应时再用单个抗血清进行检测。
用生理盐水做对照。
1.2.3 药敏试验: (1)2010-2011 年菌株药敏试验采用纸片扩散法(Kirby-Bauer,kB)进行,药敏纸片及MH 培养基均为OXIOD 公司产品。
11 种药物及抑菌环直径(mm)判定标准:环丙沙星(CIP):耐药(R)≤15,敏感(S)≥21 mm;氨苄西林(AMP):R≤13,S≥17;氯霉素(CHL):R≤12,S≥18;磺胺异噁唑(SUL):R≤10,S≥16;萘啶酸(NAL):R≤13,S≥19;头孢唑林(CFZ):R≤14,S≥18;头孢噻肟(CTX):R≤14,S≥23;阿莫西林-克拉维甲酸(AUG):R≤13,S≥18;四环素(TET):R≤11,S≥15;亚胺培南(IMP):R≤13,S≥16;庆大霉 素(GEN):R ≤12,S ≥15。
(2)2012-2013 年菌株药敏试验采用梅里埃VITEK2-Compact 全自动微生物鉴定系统GN-13 药敏卡进行机器自动判读,增加了临床常用药:复方磺胺甲噁唑(SXT)、氨苄西林/舒巴坦(AMS)、头孢他定(CAZ)、头孢吡肟(FEP)、氨曲南(AZM)、阿米卡星(AMI)、左氧氟沙星(LEV);减少了阿莫西林-克拉维甲酸(AUG)、氯霉素(CHL)、磺胺异噁唑(SUL)、四环素(TET)等药物。(3)2014-2019 年菌株药敏试验采用最小抑菌浓度(minimal inhibition concentration,MIC)法,使用革兰氏阴性需氧菌药敏检测板(上海星佰生物技术有限公司)。
2014-2015 年使用的是单块板包括16 种药物,2016-2019 年使用的两块板包括28 种药物。
增加了链霉素(STR)、头孢西丁(FOX)、头孢曲松(CRO)、多西霉素(DOX)、阿奇霉素(AZI)、吉米沙星(GMI)、卡那霉素(KAN)、米诺环素(MIN)、多黏菌素E(CT)、多黏菌素 B (PB) 等。
药敏试验均以大肠埃希菌(ATCC25922)做为质控菌株。
对三种及以上抗生素耐药,既为多重耐药(multidrug resistance,MDR)。
由于试验方法的更新,药物种类也在不断调整,但所有研究结果都是以美国临床实验室标准化协会(clinical and laboratory standards institute,CLSI)2017 年标准进行比较判读,各试验方法间和不同年代数据结果都具有可比性,按每两年进行汇总统计。
(4)产超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBLs)判定标准:在初筛实验(MIC 法)中头孢他啶或头孢噻肟MIC≥2 μg/mL;在ESBL 表型确证试验(MIC 法)中,对两组中任何一个药物,在加克拉维酸后MIC 值与不加克拉维酸的MIC 相比,降低值≤3 个倍比稀释浓度。
1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0 软件和WPS 2016专用版对数据进行统计处理。
计数资料以率表示,耐药率比较采用χ2检验。
P<0.05 为差异有统计学意义。
2.1 腹泻患者副溶血性弧菌分离情况 2010 年4 月-2019 年12 月收集肠道门诊腹泻患者粪便样本46 249件,共检出副溶血性弧菌1 853 株,检出率为4.0%(表1)。
其中20 ~39 岁青壮年组副溶血性弧菌检出率显著高于其他年龄组,差异具有统计学意义(P <0.01)。
副溶血性弧菌感染患者的男女性别比为1.2 ∶1(1 002/851)。
表1 2010-2019 年北京市腹泻患者不同年龄组副溶血性弧菌分离率、性别及主要血清型分布
表2 2010-2019 年北京市副溶血性弧菌血清型分布
续表2
表3 2010-2019 年北京市副溶血性弧菌的药敏结果
续表3
2.2 副溶血性弧菌血清分型 对1853 株副溶血性弧菌进行血清学分型,共检测出9 个O 群,30 个K 抗原,鉴定出59 种血清型(表2)。
K 抗原缺失即KUT菌株较为常见,除了O6 群外,见于各O 群菌株。
O3 ∶K6型为优势血清型1 254 株,占67.7%;O4 ∶KUT 型164 株,占8.9%;O4 ∶K8型113 株,占6.1%,位居血清型的第3 位。
前4 ~10 位血清型依次是O1 ∶KUT、O2 ∶K3、O4 ∶K9、O3 ∶KUT、O10 ∶K60、O1 ∶K36 和O4 ∶K6。其余血清型菌株数均不超过10 株。
不同年份血清型构成和分布随着年代的更迭会发生变迁。
2010 年位居第二位的血清型为O4 ∶K9,2011-2012 年则主要是O4 ∶K8,而近些年又逐步被O4 ∶KUT 所赶超。有很多新的血清型出现:如O10 ∶K60自2013 年首次出现,连续几年持续存在;罕见血清型O1 ∶K1,O3 ∶K30 为2019 年 新 出 现 血 清 型;另 外 每 年都会出现1 ~5 种仅检出1 株的一过性血清型。
2.3 耐药表型特征苄西林的耐药率虽然较其他药物处于较高水平,但呈现波动式下降:从2010-2011 年的96.8%到2014-2015 年的24.5%到2018-2019 年的17.1%,随之相对应的是敏感率有上升的趋势(表3)。
链霉素、阿莫西林-克拉维酸和磺胺异噁唑三种药的耐药率在2014-2015 年出现了异常的升高,分别为46.5%、30.2%和22.0%,之后有一个下降,随后趋于平稳上升。
其他各类药物虽然会出现不同年间的波动,但伴随着敏感率的逐渐降低,耐药率总体呈现逐渐增高趋势。
2.3.3 多重耐药及ESBLs: 对于耐三种以上抗生素的多重耐药菌株,随着年代的增加,检测的抗生素种类增多,也呈上升趋势,从2010 年的三重耐药菌株9株(3.6%);到2014 年出现耐3 种以上抗生素达到32株(20.1%);甚至2018 年以后出现最多抗16 种抗生素的多耐药菌株,各抗生素排列组合后有几十种模式。
另外,2016 年以后出现了产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株5 株。
2.3.1 药敏概况: 对1 428 株副溶血性弧菌进行耐药性检测,总体情况:对氨苄西林和多黏菌素E 耐药率最高,分别为51.5%和47.8%,敏感率分别为33.2%和52.2%(表3)。
其次对头孢唑林和链霉素的耐药率为22.9%和10.5%。
对头孢西丁、头孢噻肟和头孢吡肟等二、三、四代头孢会出现个别菌株的耐药,但敏感率均达到99%以上。
对环丙沙星、左氧氟沙星和美洛培南无耐药。
对其他各类抗生素的代表性药,均有少量菌株耐药。
2.3.2 耐药率随时间变化: 2010-2019 年菌株对氨
血清型构成变化能反映种群的变迁,进而在一定程度上反映传染源的变异。
既往研究缺少对北京市年度跨越大,系统全面的副溶血性弧菌血清型报道。本研究提供了北京市从2010-2019 年较为年完整的人源副溶血性弧菌血清型分布谱。
位于前7 位血清型分别为O3 ∶K6、O4 ∶KUT、O4 ∶K8、O1 ∶KUT、O2 ∶K3、O4 ∶K9和O3 ∶KUT,除O3 ∶K6外,与上海市、温州市和我国东南地区人源菌株优势血清构成还是有差异的[4],上海 以O3 ∶K6、O4 ∶K8、O1 ∶K25、O4 ∶K68、O4 ∶K9、O1 ∶K36 和O3 ∶K29 为主[5],温州则以O3 ∶K6、O1 ∶K1和O4 ∶K1为主[6],与食源性菌株血清型差异性更大。前3 位优势血清型中,均以20 ~39 岁年龄组所占比例最高。
这与青壮年做为社会主要生产力,外出就餐机会多、接触病原体机会多有关[7,8]。
因此,应加强重点人群的监测,加强食品安全和公共卫生监管。
O3 ∶K6 血清型自1996 年被指定为大流行株,其他血清型 如O4 ∶K68、O1 ∶K25、O1 ∶KUT 和O6 ∶K18等,被认为是从O3 ∶K6大流行株演变而来并在亚洲和欧美等国家蔓延[9,10]。
本研究也在不同年份检出这些血清型,说明这些流行血清型在北京也有散在传播,造成人群感染。
另外,O4 ∶KUT 血清型近年呈明显上升趋势,国内有些地区已超过O3 ∶K6成为优势血清型[11]。
O10 ∶K60 做 为 一 种 新 的 血 清 型,2013 年 首 次从日本的急性胃肠炎患者中分离得到,它的毒力基因、分子特征与大流行菌株高度一致[12],而本研究O10 ∶K60 菌株也分离自2013 年,之后每年都在人群中有散发,这种血清型的来源和传播链还有待于从分子水平通过系统的基因组溯源研究来阐明。
通过本研究为期十年的耐药监测,发现副溶血性弧菌耐药性有上升趋势。
对氨苄西林和多黏菌素E耐药最严重,氨苄西林与多数研究结果一致[3,13],多黏菌素E 则未见报道。
对氨基糖苷类的链霉素存在一定程度的耐药,卡那霉素则无耐药,但其他文献报道,水产品中分离到的副溶血性弧菌对卡那霉素和链霉素耐药率都很高[13]。
本研究显示对环丙沙星的敏感率高达99%以上,与其他地区报道的低敏感率、高耐药率不同[13]。
2009-2013 年,我国东南沿海地区腹泻患者分离株耐药率普遍高,氨苄西林的耐药率最高为87.1%,其次是头孢西丁(56.9%) 和头孢唑林(43.7%)且多重耐药率高达28%[4],高于本次调查结果,亦明显高于2007-2009 年来自四川、辽宁、浙江、广西等地腹泻患者分离的副溶血弧菌耐药率[14]。
与血清型分布一样,不同的研究结果存在异质性,除受菌株分离年代、不同来源背景及采取控制干预措施后会引起血清型和耐药率的波动性变化等因素的影响,也说明在不同地区感染性腹泻患者中,副溶血性弧菌型别和对抗生素的敏感程度有地域差异。
另外副溶血性弧菌人源分离株中有ESBLs 菌株,暗示质粒等可移动遗传元件介导的耐药基因的传播及扩散,尤其是对氨苄西林抗性的影响,加速了多重耐药菌株的出现。
对腹泻患者采用抗生素药物治疗时,要充分考虑其不同区域之间存在的差异,结合药敏试验结果,确保临床合理用药,以降低耐药菌株的产生。
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【成语大全】 日期:2020-03-20
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信息技术2.0能力点 [全国中小学教师信息技术应用能力提升工程试题题库及参考答案「精编」]
全国中小学教师信息技术应用能力提升工程试题题库及答案(复习资料)一、判断题题库(A为正确,B为错误)
【格言】 日期:2020-11-17
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党建工作运行机制内容有哪些_构建基层党建工作运行机制探讨
党的基层组织是党在社会基层组织中的战斗堡垒,是党的全部工作和战斗力的基础。加强和改进县级以下各类党的
【经典阅读】 日期:2020-01-22
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2023年和儿媳妇在一起幸福的句子3篇
和儿媳妇在一起幸福的句子1、假如人生不曾相遇,我还是那个我,偶尔做做梦,然后,开始日复一日的奔波,淹没在这喧嚣的城市里。我不会了解,这个世界还有这样的一个你
【格言】 日期:2023-11-10
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集合推理_七,推理与集合
七推理与集合1 期中考试数学成绩出来了,三个好朋友分别考了88分,92分,95分。他们分别考了多少分
【名人名言】 日期:2020-12-18
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电大现代教育原理_最新国家开放大学电大《现代教育原理》形考任务2试题及答案
最新国家开放大学电大《现代教育原理》形考任务2试题及答案形考任务二一、多项选择题(共17道试题,共3
【成语大全】 日期:2020-07-20
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基层党务工作基本内容_党建基本工作有哪些
党建基本工作有哪些(一) 基层党建工作包括哪些内容 选择了大学生村官这条路,你就与农村基层党
【名人名言】 日期:2020-08-06
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关于三农工作重要论述心得体会3篇
关于三农工作重要论述心得体会3篇关于三农工作重要论述心得体会篇1习近平总书记指出:“建设现代化国家离不开农业农村现代化,要继续巩固脱贫攻坚成果,扎实推进乡村
【学习心得体会】 日期:2022-10-29
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【福生庄隧道坍塌处理方案】 福生庄隧道在哪里
(呼和浩特铁路局大包电气化改造工程指挥部,内蒙古呼和浩特010050)摘要:文章介绍了福生庄隧道
【学习心得体会】 日期:2020-03-05
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五个一百工程阅读心得体会13篇
五个一百工程阅读心得体会13篇五个一百工程阅读心得体会篇1凡益之道,与时偕行。在全国网络安全和信
【学习心得体会】 日期:2022-12-07
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城管系统警示教育心得体会9篇城管系统警示教育心得体会篇1各党支部要召开多种形式的庆七一座谈会,组织广大党员进行座谈,回顾党的光辉历程,畅谈党的丰功伟绩,
【学习心得体会】 日期:2022-10-09
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发展对象培训主要内容10篇
发展对象培训主要内容10篇发展对象培训主要内容篇1怀着无比激动的心情,我有幸参加了__新区区委党校20__年第四期(区级机关)党员发展对象培训班。这次的学习
【培训心得体会】 日期:2022-09-24
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凝聚三种力量发展全过程人民民主心得体会12篇凝聚三种力量发展全过程人民民主心得体会篇1新民主主义革命是指在帝国主义和无产阶级革命时代,殖民地半殖民地国家中的
【学习心得体会】 日期:2022-08-31
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2022年全国检察长会议心得7篇
2022年全国检察长会议心得7篇2022年全国检察长会议心得篇1眼睛是心灵上的窗户,我们通过眼睛才能看到世间万物,才能看到眼前这美好的一切。拥有一双明亮的眼
【学习心得体会】 日期:2022-10-31
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在街道深化作风建设推动高质量发展走在前列动员会上讲话
在2023年街道深化作风建设推动高质量发展走在前列动员会上的讲话同志们:今天我们召开“街道深化作风建设推动高质量发展走在前列动员会”,这次会议是街道三季度召开的第一场...
【军训心得体会】 日期:2024-03-17
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全面从严治党的心得体会800字7篇
全面从严治党的心得体会800字7篇全面从严治党的心得体会800字篇1中国特色社会主义是我们党领导
【学习心得体会】 日期:2022-12-14
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矫正心得体会6篇
矫正心得体会6篇矫正心得体会篇1今天,是自己出监后第一次参加阳光中途之家组织的社区矫正方面的教育
【学习心得体会】 日期:2022-12-24
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2024年主题教育民主生活会批评与自我批评意见(38条)(范文推荐)
2023年主题教育民主生活会六个方面个人检视、相互批评意见:1 理论学习系统性不强。学习习近平新时代中国特色社会主义思想不深不透,泛泛而学的时候多,深学细照的时候少,特...
【邓小平理论】 日期:2024-03-19
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2024年交流发言:强化思想理论武装,增强奋进力量(完整)
习近平总书记指出:“一个民族要走在时代前列,就一刻不能没有理论思维,一刻不能没有思想指引。”党的十八大以来,伴随着新时代中国特色社会主义思想在实践中形成发展的历程...
【三个代表】 日期:2024-03-19
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2024年度镇年度县乡人大代表述职评议活动总结
xx镇20xx年县乡人大代表述职评议活动总结为响应县级人大常委会关于开展县乡两级人大代表述职评议活动,进一步激发代表履职活力,加强代表与人民群众的联系,提高依法履职水平...
【马克思主义】 日期:2024-03-19
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“千万工程”经验学习体会(研讨材料)
“千万工程”是总书记在浙江工作时亲自谋划、亲自部署、亲自推动的一项重大决策,也是习近平新时代中国特色社会主义思想在之江大地的生动实践。20年来,“千万工程”先后经历...
【三个代表】 日期:2024-03-19
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2024年在市政协机关工作总结会议上讲话
同志们:刚才,XX同志对市政协机关20XX年工作进行了很好的总结,很精炼,很到位,可以感受到去年机关工作确实可圈可点。XX同志宣读了表彰决定,机关优秀人员代表、先进集体代...
【邓小平理论】 日期:2024-03-18
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在全区防汛防涝动员暨河长制工作推进会上讲话提纲【完整版】
区长,各位领导,同志们:汛期已经来临,我区城区防涝工作面临强大考验,形势不容乐观。年初,区城区防涝排渍指挥部已经召开专题调度会,修订完善应急预案,建立网格化管理机...
【马克思主义】 日期:2024-03-18
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2024年镇作风整治工作实施方案(完整文档)
XX镇作风整治工作实施方案为深入贯彻落实党的二十大精神及省市区委深化作风建设的最新要求,突出重点推进干部效能提升,坚持不懈推动作风整治工作纵深发展,根据《关于印发《2...
【毛泽东思想】 日期:2024-03-18
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2024市优化法治化营商环境规范涉企行政执法实施方案【优秀范文】
xx市优化法治化营商环境规范涉企行政执法实施方案为持续优化法治化营商环境,激发市场主体活力和社会创造力,规范行政执法行为,创新行政执法方式,提升行政执法质效,着力解...
【毛泽东思想】 日期:2024-03-18
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2024年度关于开展新一轮思想状况摸底排查工作通知(完整)
关于开展新一轮思想状况摸底排查工作的通知为深入贯彻落实关于各地开展干部职工思想状况大摸底大排查情况上的批示要求和改革教育第二次调度会议精神,有针对性做好队伍教育管...
【三个代表】 日期:2024-03-18
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2024年公路养护中心主任典型事迹材料(完整文档)
“中心的工作就是心中的事业”——公路养护中心主任典型事迹材料**,男,1976年6月出生,1993年参加工作,2000年4月调入**区交通运输局工作,大学本科学历,中共党员,现任**...
【马克思主义】 日期:2024-03-17