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    大肠菌群间接计数法在水质大肠菌群监测中的应用效果研究

    时间：2023-02-25 12:05:31来源：百花范文网本文已影响人

    熊璐

    （江西省上高县疾病预防控制中心，宜春 336400）

    大肠菌群是一种用于监测水质卫生情况的常用指示菌，快速、准确监测此菌群，卫生学意义重大。现阶段，在快速监测大肠菌群的各种方法中，多为以核酸为基础的分子生物学检测，这些技术对于相关实验条件有着比较高的要求，并且价格贵，因而对其实际应用造成了影响与限制[1]。当前比较常用的水质大肠菌群间接计数法（MPN法）与耐热大肠菌群MPN法相比较，有较多的操作步骤，较为繁琐，工作量较大[2]。本文在检测水质大肠菌群中采用大肠菌群MPN法，验证其在检测大肠菌群中的效果，并与水质大肠菌群MPN法的人力消耗、检测时间、物力及大肠菌群检出率进行对比，旨在剖析耐热大肠菌群MPN法的应用价值。

    1.1 材料、试剂与仪器 在2020年1月至2021年1月间，对采集本地区各类水质，即水库水、水源水、农村生活饮用水、城市生活饮用水等，试剂主要有煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、伊红美蓝琼脂、革兰染色液及乳糖蛋白胨培养液等。仪器：诸暨市超泽衡器设备有限公司生产的JM-A电子天平，澳柯玛股份有限公司生产的YC-180澳柯玛冰箱，苏州安泰空气技术有限公司生产的BSC-1300ⅡA2生物安全柜，山东新华医疗器械厂生产的CJV1500T洁净工作台，山东新华医疗器械厂生产的LMQC立式灭菌器，DLAB Scientific Inc生产的5V电动移液枪。

    1.2 方法 （1）检测前的准备。高压灭菌消毒采水容器，向容器当中置入水样本，于6 h内送检。（2）检测水质大肠菌群。采用总大肠菌群MPN法[《生活饮用水标准检验方法微生物指标》（GB/T5750.12-200）]。采用灭菌吸管精取水样10 mL，接种至双料乳糖蛋白胨培养液当中（10 mL），再用灭菌吸管精取水样1 mL，接种至单料乳糖蛋白胨培养液当中（10 mL），另取水样1 mL，加入到生理盐水当中（9 mL），充分混匀；
    用灭菌吸管1 mL精取单料乳糖蛋白胨培养液当中（10 mL），各稀释度接种5管，一共为15管。把接种管置入到培养箱当中（温度设定为[（36±1）℃]，持续培养（24±2）h，若产酸、产气管，那么接种至伊红美蓝琼脂平板上，培养箱中培养18~24 h，与深紫黑色，有金属光泽相符；
    淡紫红色，中心存在比较深的菌落，做革兰染色、镜检以及证实实验。（3）检测耐热大肠菌群。用MPN法实施检测[《耐热大肠菌群检验计数》（GB4789.3-2018）]。采用灭菌吸管精取水样10 mL，接种至LST肉汤管培养液当中（10 mL），另用灭菌吸管精取水样1 mL，接种至LST培养液（10 mL）当中，再去水样1 mL，加入至生理盐水当中（9 mL），充分混匀；
    用灭菌吸管精取1 mL水样，在LST培养液（10 mL）中接种，各稀释度接种3管，一共为9管。把接种管置入到培养箱当中，持续培养24~48 h，产气管实施复发酵试验，取1环培养物，接种入BGLB管当中，培养（48±12）h，对大肠菌群阳性管数进行记录，查MPN表，将大肠菌群MPN值得出。（4）两种方法一致性检验。用Kappa检验验证MPN法与总大肠菌群MPN法对水质当中大肠菌群进行检验的一致性，证明两方法都可以用作检测水质中大肠菌群。

    1.3 观察指标 就两种方法对各项阳性标本进行检测的人力、物力、费用、时间进行对比，另对两种检测效果进行评价，且分析其大肠菌群的阳性率。

    1.4 统计学处理SPSS 24.0处理数据，t、χ2分别对计量、计数资料进行检验，Kappa值检验一致性，若≥0.75，即一致性好；
    P＜0.05为差异有统计学意义。

    2.1 两种方法对水质大肠菌群进行检测的一致性两种方法对水质大肠菌群进行检验，有着较好的一致性，Kappa=0.91，见表1。

    表1 2种方法检验水质大肠菌群的一致性（MPN/100 mL）

    2.2 两种MPN法对水质菌群阳性率进行检测对比两种方法在对水质大肠菌群阳性率进行检测上，经对比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

    表2 对比2种方法检测水质菌群阳性率的结果

    2.3 两种方法所耗成本对比 耐热大肠菌群MPN法相对应的消耗人力费用、试剂费用、仪器耗损费用均较水质大肠菌群MPN法低（P＜0.05），消耗时间较水质大肠菌群MPN法短（P＜0.05），见表3。

    表3 对比2种方法所耗成本

    大肠菌群在人、动物粪便中广泛存在，人、畜粪便对环境所造成的污染，实为大肠菌群在自然界当中长久生存的原因所致，因此，将其当做粪便污染指标，对水的卫生质量进行评价，对其有无被肠道致病菌污染的可能进行推断[3]。若在水质当中存在大肠菌群，提示水质没有能够做到广泛性的消毒处理，在加工之后，如果保存条件不理想，容易遭受污染[4]。对大肠菌群进行检验，对水的卫生管理有利，并且能够为人们的健康、安全提供切实维护。

    大肠菌群是一类比较常用的水质卫生监测指示菌，廉价、快速且便利的检测方法对于保证水质卫生，起到至关重要的作用[5]。现阶段，在检测大肠菌群上，国内外已出现许多方法，其中比较常用的有核酸杂交技术、聚合酶链式反应（PCR）、以16Sr RNA与GyaB为基础的检测技术等，但需要指出的是，这些方法尽管比较精确、快捷，但需要用到一些高精密仪器或设备，而且检测费用也比较昂贵，因而对于基层疾控中心并不适用[6]。

    通常情况下，在检测水质大肠菌群时，多采用国标当中的MPN检测方法，但需要强调的是，此种方法耗费的人力、物力多，而且还有着较长的操作时间。本文用国标GB4789.3-2016当中的MPN方法，对水质的大肠菌群进行检测，通过两种方法对大肠菌群的关联性进行检验，最终结果得知，两种MPN法对水质大肠菌群进行检测的一致性较好，表明两种方法都能够用作检测大肠菌群，并且通过两种方法大肠菌群的检出率对比发现，两种方法对水质大肠菌群阳性率进行检测对比，差异并不明显。表明耐热大肠菌群MPN法用作检测水质大肠菌群，具有一定的可行性[7-8]。另从本文得知，耐热大肠菌群MPN法无论是在仪器耗损费上，还是在消耗人力费用、试剂费用上，均较水质大肠菌群MPN法低，另外，在消耗时间上，较水质大肠菌群MPN法短，表明耐热大肠菌群MPN法无论是在时间效益上，还是在经济效益上，均较好。

    综上，两种方法在检测大肠菌群阳性率上，基本相当，而GB/T5750.12-2006当中的MPN检测方法与GB4789.3-2018当中的MPN检测方法相比较，需要投入更多的人、物、财力，并且操作也比较繁琐，需要花费较长的时间。所以，针对基层疾控单位而言，选用GB4789.3-2018当中的MPN法对GB/T5750.12-2006当中的MPN法进行替代，借此对水质当中的大肠菌群进行检测，操作简便，能够因地制宜且节省时间与开支。

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