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    脑卒中后认知功能障碍患者miR-20a-5p,miR-29c-3p表达及相关因素

    时间：2023-06-30 14:35:05来源：百花范文网本文已影响人

    商慧鲜 许宏侠 郭 芬

    河南大学第一附属医院，河南 开封 475000

    脑卒中主要包括缺血性脑卒中与出血性脑卒中两种，指多种原因导致的脑血管、脑组织受损引发的临床症状或致死［1-3］。脑卒中病因复杂，高血压、糖尿病以及不良生活习惯等因素均可引发该病。脑卒中患者起病较急，发病后可表现出头晕、恶心、呕吐，严重影响机体健康［4-6］。认知障碍是脑卒中患者常见症状，指的是因脑血管疾病导致的认知功能减退，血管性认知障碍是脑卒中后认知功能障碍的主要组成部分，约占全部脑卒中后认知功能障碍的62.6%。已有多位学者证实，脑卒中后认知功能障碍与脑卒中患者预后不良有紧密关系，目前已成为一项较为严重的社会、公共卫生问题［7-9］。microRNAs（miRNAs）是一种单链非编码小分子RNA，对机体功能有一定调节作用，如miRNAs 可调节恶性肿瘤、急性脑梗死等疾病的发生与发展［10-12］。近年来，有研究指出miRNAs可用来诊断疾病病症，具有成为疾病生物标记物的潜能［13-15］。但目前关于miRNAs 与脑卒中后认知功能障碍联系的研究较少，脑卒中患者血清miRNAs的作用仍不明确。基于此，笔者将河南大学第一附属医院159例脑卒中患者纳入研究，根据简易精神状态评价量表（MMSE）得分对其认知功能障碍情况进行分组，对比分析了miR-20a-5p、miR-29c-3p在脑卒中后认知功能障碍患者中的表达情况及影响因素，探究了miR-20a-5p、miR-29c-3p 表达与认知功能障碍的联系。

    1.1 一般资料选取河南大学第一附属医院2020-01—2022-06 收入的脑卒中患者159 例，根据其认知功能情况分为正常组（62例）、轻度障碍组（38例）、中度障碍组（36例）、重度障碍组（23例）。其中，正常组男35 例，女27 例；
    年龄43～85（64.55±8.03）岁。轻度障碍组男20 例，女18 例；
    年龄49～86（64.95±7.84）岁。中度障碍组男19例，女17例；
    年龄48～82（64.81±8.17）岁。重度障碍组男13 例，女10例；
    年龄47～84（65.35±7.71）岁。4 组患者性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究符合《赫尔辛基宣言》内容。

    1.2 诊断标准以中华医学会神经病学分会制定的2019版《中国各类主要脑血管病诊断要点》导向拟定脑卒中诊断标准：（1）体征存在单侧肢体无力麻木，单侧面部麻木、语言困难、单侧或双侧视力丧失、眩晕且伴随呕吐；
    （2）出血性脑卒中患者颅脑CT 平扫可见高密度病灶，CT 值为60～80 Hu，高密度血肿周围存在低密度水肿带围绕，部分存在脑室、脑池、脑沟受压，中线结构位移。缺血性脑卒中低密度病灶，累及灰白质，部分有水肿和占位；
    （3）缺血性脑卒中患者血管评估时可见血管严重狭窄或闭塞。

    1.3 纳入与排除标准纳入标准：（1）符合上述诊断标准，入院后明确诊断为脑卒中；
    （2）年龄在18～90岁内；
    （3）病变位于基底节区域，未出现广泛性病灶；
    （4）配合完成MMSE量表评测，结果清晰；
    （5）可配合完成其他体征检查；
    （6）发病时间在14 d内；
    （7）了解研究内容，知晓利弊，患者或家属已签署知情同意书。排除标准：（1）合并恶性肿瘤，凝血、免疫或肝肾功能异常；
    （2）外伤引发的颅内、蛛网膜下腔出血；
    （3）患病前有认知功能障碍，如过往有阿尔茨海默病或帕金森疾病；
    （4）过往有精神疾病史；
    （5）合并严重躯体疾病，生命体征不稳；
    （6）妊娠或哺乳期妇女。

    1.4 方法所有受试者入院后3 d 于清晨空腹状态下取静脉血5 mL 后置于真空管，将试管垂直30 min等待凝块，于室温下行30 r/min离心10 min，再于4 ℃下13 000 r/min离心10 min，取血清置于—80 ℃待测。用miRNA转化试剂盒提取miRNA后检测RNA纯度、浓度（浓度范围20～102 ng/L）、纯度（1.81～2.01），进行逆转录，合成cDNA，用实时荧光定量（qRT-PCR）测其表达量，用2-△△Ct法算mRNA相对表达量。

    1.5 观察指标（1）人口学资料，入院后通过查阅病历与询问方式收集患者性别、年龄、病程、高血压、糖尿病等基础疾病史；
    （2）疾病相关资料，通过影像学检查结果记录患者脑卒中类型、病变部位；
    （3）MMSE量表得分，与入院后1 d对患者进行MMSE量表评估，测定其认知功能。量表含7个维度，测试结果与文化水平有关，正常界值划分为文盲、小学、初中及以上分别大于17、20、24分，27～30分为认知功能正常、27分以下为认知功能障碍。其中，21～26、10～20、0～9分为轻度、中度、重度认知功能障碍。

    1.6 统计学处理本研究数据均由统计软件SPSS 22.0进行处理，计数资料如性别、高血压、糖尿病、不良生活习惯用（n，%）表示，行χ2检验；
    符合正态分布计量资料如年龄、miR-20a-5p、miR-29c-3p表达量用均数±标准差（±s）表示，行t 检验。影响因素分析用二元Logistic回归模型分析，P<0.05为差异有统计学意义。

    2.1 脑卒中后不同认知功能障碍患者miR-20a-5p、miR-29c-3p 表达比较4 组患者血清miR-20a-5p、miR-29c-3p mRNA 表达比较有显著差异，正常组miR-20a-5p mRNA表达水平<轻度障碍组<中度障碍组<重度障碍组，miR-29c-3p mRNA 表达水平>轻度障碍组>中度障碍组>重度障碍组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

    表1 4组血清miR-20a-5p、miR-29c-3p mRNA表达比较（±s）Table1 Comparison of serum miR-20a-5p and miR-29c-3p mRNA expression in four groups （±s）

    表1 4组血清miR-20a-5p、miR-29c-3p mRNA表达比较（±s）Table1 Comparison of serum miR-20a-5p and miR-29c-3p mRNA expression in four groups （±s）

    注：轻度障碍组、中度障碍组、重度障碍组与正常组比较，aP<0.05；
    中度障碍组、重度障碍组与轻度障碍组比较，bP<0.05；
    重度障碍组与中度障碍组比较，cP<0.05

    组别正常组轻度障碍组中度障碍组重度障碍组F值P值n 62 38 36 23 miR-20a-5p 0.18±0.09 0.44±0.05a 0.70±0.08ab 0.87±0.09abc 568.948<0.001 miR-29c-3p 1.01±0.08 0.83±0.05a 0.74±0.06ab 0.52±0.03abc 369.134<0.001

    2.2 影响脑卒中后认知功能障碍患者miR-20a-5p、miR-29c-3p 表达的单因素分析以miR-20a-5p、miR-29c-3p 鉴别轻度、中度认知功能障碍患者界值（0.51、0.78）为分界点将97例脑卒中后认知功能障碍患者分为miR-20a-5p高表达组（≥0.51，n=60）、低表达组（<0.51，n=37）与miR-29c-3p高表达组（≥0.78，n=43）、低表达组（<0.78，n=54）。

    就miR-20a-5p 表达情况分析，高表达组年龄≥68、合并高血压与糖尿病、MMSE 得分<15 占比显著高于低表达组，差异有统计学意义（P<0.05）；
    就miR-29c-3p 表达情况分析，低表达组年龄≥68、合并高血压与糖尿病、MMSE得分<15占比显著高于高表达组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

    表2 影响脑卒中后认知功能障碍患者miR-20a-5p、miR-29c-3p表达的单因素分析 ［例（%）］Table2 Univariate analysis affecting the expression of miR-20a-5p and miR-29c-3p in patients with cognitive dysfunction after stroke ［n（%）］

    2.3 影响脑卒中后认知功能障碍患者miR-20a-5p表达的Logistic回归分析以年龄（≥68=1，<68=0）、高血压（有=1，无=0）、糖尿病（有=1，无=0）、MMSE得分（≥15=1，<15=0）为自变量，miR-20a-5p表达（高表达=1，低表达=0）为因变量，Logistic 回归分析显示年龄、高血压、糖尿病、MMSE是影响miR-20a-5p表达的因素（P<0.05）。见表3。

    表3 影响miR-20a-5p表达的Logistic回归分析Table3 Logistic regression analysis affecting miR-20a-5p expression

    2.4 影响脑卒中后认知功能障碍患者miR-29c-3p表达的Logistic回归分析以年龄（≥68=1，<68=0）、高血压（有=1，无=0）、糖尿病（有=1，无=0）、MMSE得分（≥15=1，<15=0）为自变量，miR-29c-3p表达（高表达=1，低表达=0）为因变量，Logistic 回归分析显示年龄、高血压、糖尿病、MMSE是影响miR-20a-5p表达的因素（P<0.05）。见表4。

    表4 影响miR-29c-3p表达的Logistic回归分析Table4 Logistic regression analysis affecting miR-29c-3p expression

    脑卒中是临床常见脑血管疾病，对人体危害较大，除了会造成运动功能障碍外，还会导致认知功能异常，脑卒中后认知功能障碍患者记忆、定向、计算以及各认知领域均会出现不同程度损害［16-20］。miRNAs作为非编码RNA，已被证明在多种疾病发展中扮演了重要角色，有研究显示，对于急性脑梗死患者，其脑脊液中miRNAs（含miR-27a、miR-137等）水平均出现了明显变化，还有研究显示miRNAs与脑卒中缺氧状态下神经元细胞存活与死亡有一定联系，可调控机体认知障碍，但目前关于其在脑卒中既脑卒中后认知功能障碍中的作用仍不明确［21-25］。本研究通过qRT-PCR方式测出miR-20a-5p、miR-29c-3p 表达水平，进一步探究了其在脑卒中后认知功能障碍患者中的作用。

    在本研究中159例脑卒中患者血清miR-20a-5p、miR-29c-3pmRNA 表达比较有显著差异，正常组miR-20a-5pmRNA 表达水平<轻度障碍组<中度障碍组<重度障碍组，miR-29c-3pmRNA 表达水平>轻度障碍组>中度障碍组>重度障碍组，这与研究结论一致［26-30］。说明脑卒中后认知功能障碍患者miR-20a-5p、miR-29c-3pmRNA均出现异常表达，且认知障碍越严重的患者异常表达越明显。推测原因在于，miRNAs参与了脑高级功能如学习、记忆等，其表达与神经元突触可塑性以及认知疾病有显著联系。miR-20a-5p能够调控促神经元分化因子表达，通过调节缺氧诱导因子1 a改变卒中后缺氧状态下神经细胞死亡或存活状态从而实现对认知功能的影响［31-33］。miR-29c-3p 的目标基因是信号转导及转录激活蛋白3（STAT3），STAT3 激活后可参与促进神经祖细胞神经胶质分化，抑制神经祖细胞神经元分化，而miR-29c-3p 能够通过调控STAT3 实现对认知功能的影响。

    此外，本研究通过对人口学及相关疾病治疗进行分析发现，年龄、高血压、糖尿病、MMSE得分是影响miR-20a-5p、miR-29c-3p 的因素。原因可能为年龄、高血压、糖尿病、MMSE 得分可通过影响认知功能障碍情况实现对miR-20a-5p、miR-29c-3p的影响。如从年龄方面分析，随着年龄的上升，脑皮质细胞数量下降，更易出现认知功能损伤［34-36］。从疾病方面分析，高血压可能会影响脑卒中患者血脑屏障完整性，导致脑血管硬化，进而致使脑白质变性与功能障碍［37-39］。糖尿病患者胰岛素抵抗会导致血糖调节紊乱，而高血糖环境更易发生无氧代谢、氧化应激等反应，损伤脑部血管与神经元［40-42］。而MMSE 得分是评估认知功能障碍的常用指标，MMSE 分数越高说明认知功能越好。

    脑卒中后认知功能障碍患者miR-20a-5pmRNA存在异常高表达，miR-29c-3pmRNA存在异常低表达，且认知功能障碍越严重，异常表达越明显。年龄、高血压、糖尿病、MMSE 得分是miR-20a-5p、miR-29c-3p表达的影响因素。

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